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金沙网站:我国科学家实现小鼠个体水平的靶向遗传筛选

时间:2019/7/8 18:56:15  作者:  来源:  浏览:0  评论:0
内容摘要:  近年来,CRISPR-Cas9技术介导的突变筛选在小鼠和人细胞中已被广泛应用,而实现高效的小鼠个体水平遗传筛选对哺乳动物功能基因组研究具有重要意义。  中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)李劲松和邹卫国研究团队合作应用孤雄单倍体胚胎干细胞(“人造精...
         近年来,CRISPR-Cas9技术介导的突变筛选在小鼠和人细胞中已被广泛应用,而实现高效的小鼠个体水平遗传筛选对哺乳动物功能基因组研究具有重要意义。
  中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)李劲松和邹卫国研究团队合作应用孤雄单倍体胚胎干细胞(“人造精子细胞”)介导的半克隆技术,结合CRISPR-Cas9介导的基因编辑技术,成功实现了小鼠骨发育相关基因的个体水平遗传筛选,并揭示Irx5基因作为骨发育过程中重要调控因子,通过抑制PPARγ分子促进成骨分化并抑制成脂分化,为小鼠发育过程中关键基因功能研究开辟了新的途径。该研究成果7月2日在线发表于《美国科学公共图书馆·生物》(Plos Biology)。
  李劲松研究员告诉《中国科学报》记者,科研人员基于体外成骨分化过程高通量测序分析数据,筛选了72个潜在骨发育相关基因,建立了一个携带216个向导RNA(sgRNA)的单倍体干细胞库(即“人造精子细胞库”),其中的每个“人造精子”一般都携带一个针对不同基因的“sgRNA导航器”,精确定位到靶基因上并对其进行基因编辑。李劲松解释道,“我们将这些携带修饰基因的‘人造精子’逐一注射入小鼠MⅡ期卵母细胞,一个月不到,就获得了400多只携带不同突变基因的半克隆小鼠。”
  邹卫国研究员说:“我们在这些小鼠出生后,就开始对其进行骨骼整体染色分析,依据骨骼大小、钙化、颅顶骨、长骨、椎骨形态等指标对每只小鼠进行评分。与此同时,我们利用每只小鼠携带的‘sgRNA导航器’对骨发育异常的小鼠所携带的‘靶基因’的测序分析,最终确定其是否存在基因突变。”

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